高效液相色谱仪常见 高效液相色谱仪常见问题汇总

LC-100高效液相色谱仪使用维护 常见问题解决 详细点

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高效液相色谱仪有哪些主要组成部件,各有什么作用？

高效液相色谱仪由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。

储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程。

各组分在移动速度上产生较大的别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。

扩展资料：

使用高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。

高效液相色谱作为一种重要的分析方法，广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的别，它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相，适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。

参考资料来源：

高效液相色谱法常出现的故障及解决的方法

常出现的问题有：

1、漏液

原因：换色谱柱或过滤砂芯时未拧紧

处理方法：拧紧接头处，下面垫滤纸以检查在液相工作时是否还有液体漏出

2、压力高

原因：过滤砂芯或过滤烧结头堵塞；色谱柱筛板堵塞或固定相吸附东西；管路，长菌

处理方法：更换过滤砂芯或过滤烧结头；柱子使用时间过长，更换色谱柱；清洗管路

3、基线噪音大

原因：色谱柱内存有杂质，流通池

处理方法：打开色谱柱出口端，冲洗色谱柱将物冲出

4、压力指示不稳，又无液体流过

原因：大量气泡进入泵体

处理方法：在脱气的同时，用一个针筒在泵的出口处帮助抽出空气

高效液相色谱仪常用的检测器是

正确:D

解析：紫外检测器是高效液相色谱仪常用的检测器，其灵敏度、重复性及线性范围均较好，由于对温度和流速不敏感，适用于进行梯度洗脱

。

高效液相色谱仪的常用检测器有哪几种，有什么区别吗？

检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用检测器有紫外吸收、荧光、示折光、化学发光等。

PDA检测器：即紫外检测器，点时间可检测单一点处吸收值。

DAD检测器：二极管阵列检测器，可理解为无数个PDA检测器串联。即点时间可检测某一波段吸收值，比PDA检测器定性能力强大。

荧光检测器：对某些吸收紫外光后可发射荧光的物质进行检测，灵敏度较高。

蒸发光散射检测器：可以检测没有紫外吸收的有机物质（不可用于梯度洗脱）

示折光检测器：根据折射率的变化对样品浓度检测（不可用于梯度洗脱），检测器，但是定性能力和PDA一样。 1.紫外可见吸收检测器(ultriolet－visibledetector，UVD)

紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。

(1)紫外吸收检测器

紫外吸收检测器常用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并安装一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm～800nm)。它有两个流通池，一个作参比，一个作测量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。当组分进入测量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。

局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不能做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不能小于溶剂的截止波长。

(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)

也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。它采用光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描采集数据，得到吸收值(A)是保留时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。由此可及时观察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有佳选择性和灵敏度的波长。

单光束二极管阵列检测器，光源发出的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测。阵列式接收器上的光信号学的方法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超过色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描。

2．荧光检测器(fluorescencedetector，FD) 荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物。某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测。其小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量分析；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性范围不如紫外检测器宽。近年来，采用激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比，因而具有很高的灵敏度，在痕量和超痕量分析中得到广泛应用。

3.示折光检测器(differentialrefractiveIndexdetector，RID)

示折光检测器是一种浓度型通用检测器，对所有溶质都有响应，某些不能用选择性检测器检测的组分，如高分子化合物、糖类、脂肪烷烃等，可用示检测器检测。示检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。光从一种介质进入另一种介质时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。只要样品组分与流动相的折光指数不同，就可被检测，二者相愈大，灵敏度愈高，在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比。 4.电化学检测器(elec)chemicaldetector，ED)

电化学检测器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器，属选择性检测器，可检测具有电活性的化合物。目前它已在各种无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、环境污染物、生化制品、农及医等的测定中获得了广泛的应用。其中，电导检测器在离子色谱中应用多。

电化学检测器的优点是：

①灵敏度高，小检测量～般为ng级，有目可达pg级；

②选择性好，可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质；

③线性范围宽，一般为4～5个数量级；

④设备简单，成本较低；

⑤易于自动作。

5.化学发光检测器(c。iluminescencedetector，CD) 化学发光检测器是近年来发展起来的一种快速、灵敏的新型检测器，因其设备简单、价廉、线性范围宽等优点。其原理是基于某些物质在常温下进行化学反应，生成处于激发态势反应中间体或反应产物，当它们从激发态返回基态时，就发射出光子。由于物质激发态的能量是来自化学反应，故叫作化学发光。当分离组分从色谱柱中洗脱出来后，立即与适当的化学发光试剂混合，引起化学反应，导致发光物质产生辐射，其光强度与该物质的浓度成正比。

这种检测器不需要光源，也不需要复杂的光学系统，只要有恒流泵，将化学发光试剂以一定的流速泵入混合器中，使之与柱流出物迅速而又均匀地混合产生化学发光，通过光电倍增管将光信号变成电信号，就可进行检测。这种检测器的小检出量可达10-12g。

高效液相色谱常用哪些检测器

1，紫外吸收（UV）检测器。

紫外吸收检测器简称紫外检测器，是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动相不吸收光，则吸收度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。

2，光电二极管阵列（IJDA）检测器。（或硅靶摄像管等）

它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。与普通UV-VIS检测器不同的是，普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池。而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检。

3，示折光监测器（RID）。

示折光监测器是高压液相色谱仪常用的一种中等灵敏度检测器（约10-6g/mL）。利用纯流动相和含有组分的洗脱液二者折光率之间的别进行检验。由于折光率随温度变化，检测器要求有一恒温小空间，使温度稳定，能控制在±0.001℃以内。依据反射定律，在玻璃-液体界面，反射光的程度与入射角和玻璃与液体的折光率有关。折光率改变时，反射光的强度也发生变化，在光电管中产生的信号被放大和记录下来。在环境分析测试中，示折光检测器用于杀虫剂的液相色谱分离分析，如、滴滴涕、滴滴滴、γ-六六六、的分离分析等等。

4，蒸发光散射检测器。

蒸发光散射检测器（EvaporativeLight-scatteringDetector）是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。

5，荧光检测器。

荧光检测器(Fluorescence Detector,简称FLD)是高压液相色谱仪常用的一种检测器。用紫外线照射色谱馏分，当试样组分具有荧光性能时，即可检出。